Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide – Spectrométrie de masse pour la bioanalyse : maitriser ses méthodes

Réf : BCH-05

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Durée

2 journées - 14 heures
// De 9h00 à 17h00

Pédagogie

Effectif : 8 personnes
Pédagogie participative alternant présentations et échanges interactifs
Ludo pédagogie
Séances de questions / réponses
Etudes de cas concrets
La formation sera sanctionnée par une attestation de formation

Moyens pédagogiques et techniques d’encadrement

Un vidéoprojecteur // Connexion WIFI haut-débit // Un support de cours numérique // Un paperboard

Accessibilité

Accessibilité dépendante du site de formation en vos murs

Frais pédagogique

Sur devis

Formateur

M. Arnaud SALVADOR

Public concerné

Techniciens utilisant déjà les Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide – spectrométrie de masse pour la bioanalyse

Prérequis

Avoir déjà utilisé les Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide – spectrométrie de masse pour la bioanalyse

Objectifs / Compétences

de la formation Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide - Spectrométrie de masse pour la bioanalyse : maitriser ses méthodes

Acquérir une grande maitrise tant sur le plan de la compréhension théorique que de sa mise en œuvre pratique

Être en mesure de proposer une configuration LC-MS/MS adéquate en vue d’une analyse dans les matrices biologiques (Choix des modes d’ionisations, des modes d’acquisition, et de la chromatographie selon les molécules à analyser)

Comprendre et prévoir les principaux paramètres influançant une analyse LC/MS/MS

Maîtriser les principaux paramètres de la préparation d’échantillon

Être en mesure de proposer une stratégie de développement d’une méthode de préparation d’échantillon

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Programme de la formation: Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide – Spectrométrie de masse pour la bioanalyse : maitriser ses méthodes

I. PREPARATION D'ECHANTILLONS

Introduction

Rappels des notions de bases (pH-métrie, rappel sur les différentes interactions chimiques, les mécanismes de rétention mises en jeu)

Importance de bien contrôler le pH

Stratégies pour les matrices liquides

L’extraction Liquide-liquide classique et ses évolutions : Extraction liquide-liquide sur support solide / L’extraction Liquide-Liquide sur support solide (sLLE) / La micro-extraction en phase liquide (LPME) / L’extraction liquide liquide par dispersion de microgouttelettes (DLLME)

Extraction en phase solide (SPE) : SPE phase normale, SPE phase inverse, SPE ionique, SPE mixte / SPE ultra sélective (Immunoextraction, empreinte moléculaire…)

Automatisation des méthodes d’extraction : cas de la SPE

Développement de méthodes SPE ? Comment s’y prendre ? Rationaliser ses essais

Mise en situation pour la SPE – jeu de cartes SPE

II. COUPLAGE LC/MS/MS

Introduction et rappels sur la spectrométrie de masse

Le vocabulaire du couplage de la chromatographie avec la spectrométrie de masse

Les principes de la LC/MS/MS

Schéma général d’un spectromètre de masse, les isotopes et leurs utilisations

La Formation des ions pour le couplage LC-MS/MS en bio analyse

De la GC-MS vers la LC-MS : La LC-MS un mariage de raison ?

Etat des lieux et contraintes pour l’ionisation

Rappels sur les principes des principales sources d’ionisation pour la LC-MS (Electrospray, APCI et APPI)

Séparation et détections des ions

Quel(s) analyseur(s) pour La LC/MS/MS bioanalytique quantitative ? Principes de fonctionnement et critères de choix

Apports de la MS/MS

Triples quadripôles : Les différents modes de balayages

La Chromatographie liquide

Le processus de séparation chromatographique : Le chromatogramme (rétention, résolution,..) / Effets de la température, du débit, du volume d’injection,..

Les modes de séparation : Phase inverse / Phase normale et HILIC / La chromatographie ionique et d’appariement d’ions

Optimisation HPLC : Isocratique vs gradient d’élution / Les choix de solvants, pH, sels et effets

Application quantitative de la spectrométrie de masse

Pourquoi la LC/MS/MS quantitative

Les différentes interférences : Visibles et non visibles / L’effet matrice / Définition, comment l’évaluer et l’éliminer / le réduire

Comment développer une méthode de quantification sensible, spécifique et robuste ?

Choix des conditions chromatographiques : Choisir sa phase stationnaire et sa phase mobile

Choix des conditions d’ionisation et optimisation

Choisir le bon analyseur et bien l’optimiser : L’effet « cross talk » / Ouvrir la résolution ou non ? / Adapter les temps d’acquisition / Définition /Comment l’évaluer et l’éliminer / le réduire

Problèmes rencontrés et solutions en LC/MS/MS

Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide – Spectrométrie de masse pour la bioanalyse : maitriser ses méthodes

Réf : BCH-05

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    Dernière modification le 17 mai 2024 à 11h20