Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide – Spectrométrie de masse pour la bioanalyse : maitriser ses méthodes
Réf : BCH-05
Durée
2 journées - 14 heures
// De 9h00 à 17h00
Pédagogie
Effectif : 8 personnes
Pédagogie participative alternant présentations et échanges interactifs
Ludo pédagogie
Séances de questions / réponses
Etudes de cas concrets
La formation sera sanctionnée par une attestation de formation
Moyens pédagogiques et techniques d’encadrement
Un vidéoprojecteur // Connexion WIFI haut-débit // Un support de cours numérique // Un paperboard
Accessibilité
Accessibilité dépendante du site de formation en vos murs
Frais pédagogique
Sur devis
Formateur
M. Arnaud SALVADOR
Public concerné
Techniciens utilisant déjà les Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide – spectrométrie de masse pour la bioanalyse
Prérequis
Avoir déjà utilisé les Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide – spectrométrie de masse pour la bioanalyse
Objectifs / Compétences
de la formation Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide - Spectrométrie de masse pour la bioanalyse : maitriser ses méthodes
Acquérir une grande maitrise tant sur le plan de la compréhension théorique que de sa mise en œuvre pratique
Être en mesure de proposer une configuration LC-MS/MS adéquate en vue d’une analyse dans les matrices biologiques (Choix des modes d’ionisations, des modes d’acquisition, et de la chromatographie selon les molécules à analyser)
Comprendre et prévoir les principaux paramètres influançant une analyse LC/MS/MS
Maîtriser les principaux paramètres de la préparation d’échantillon
Être en mesure de proposer une stratégie de développement d’une méthode de préparation d’échantillon
Programme de la formation: Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide – Spectrométrie de masse pour la bioanalyse : maitriser ses méthodes
I. PREPARATION D'ECHANTILLONS
Introduction
Rappels des notions de bases (pH-métrie, rappel sur les différentes interactions chimiques, les mécanismes de rétention mises en jeu)
Importance de bien contrôler le pH
Stratégies pour les matrices liquides
L’extraction Liquide-liquide classique et ses évolutions : Extraction liquide-liquide sur support solide / L’extraction Liquide-Liquide sur support solide (sLLE) / La micro-extraction en phase liquide (LPME) / L’extraction liquide liquide par dispersion de microgouttelettes (DLLME)
Extraction en phase solide (SPE) : SPE phase normale, SPE phase inverse, SPE ionique, SPE mixte / SPE ultra sélective (Immunoextraction, empreinte moléculaire…)
Automatisation des méthodes d’extraction : cas de la SPE
Développement de méthodes SPE ? Comment s’y prendre ? Rationaliser ses essais
Mise en situation pour la SPE – jeu de cartes SPE
II. COUPLAGE LC/MS/MS
Introduction et rappels sur la spectrométrie de masse
Le vocabulaire du couplage de la chromatographie avec la spectrométrie de masse
Les principes de la LC/MS/MS
Schéma général d’un spectromètre de masse, les isotopes et leurs utilisations
La Formation des ions pour le couplage LC-MS/MS en bio analyse
De la GC-MS vers la LC-MS : La LC-MS un mariage de raison ?
Etat des lieux et contraintes pour l’ionisation
Rappels sur les principes des principales sources d’ionisation pour la LC-MS (Electrospray, APCI et APPI)
Séparation et détections des ions
Quel(s) analyseur(s) pour La LC/MS/MS bioanalytique quantitative ? Principes de fonctionnement et critères de choix
Apports de la MS/MS
Triples quadripôles : Les différents modes de balayages
La Chromatographie liquide
Le processus de séparation chromatographique : Le chromatogramme (rétention, résolution,..) / Effets de la température, du débit, du volume d’injection,..
Les modes de séparation : Phase inverse / Phase normale et HILIC / La chromatographie ionique et d’appariement d’ions
Optimisation HPLC : Isocratique vs gradient d’élution / Les choix de solvants, pH, sels et effets
Application quantitative de la spectrométrie de masse
Pourquoi la LC/MS/MS quantitative
Les différentes interférences : Visibles et non visibles / L’effet matrice / Définition, comment l’évaluer et l’éliminer / le réduire
Comment développer une méthode de quantification sensible, spécifique et robuste ?
Choix des conditions chromatographiques : Choisir sa phase stationnaire et sa phase mobile
Choix des conditions d’ionisation et optimisation
Choisir le bon analyseur et bien l’optimiser : L’effet « cross talk » / Ouvrir la résolution ou non ? / Adapter les temps d’acquisition / Définition /Comment l’évaluer et l’éliminer / le réduire
Problèmes rencontrés et solutions en LC/MS/MS
Techniques de préparations d’échantillons et couplage chromatographie liquide – Spectrométrie de masse pour la bioanalyse : maitriser ses méthodes
Réf : BCH-05
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